烯酰还原酶结构域作用于反式双键，产生完全饱和的亚甲基。在由动物FAS脂肪酸生物合成，该反应进行与4'-的攻击亲 - - [R在3- NADPH的氢化物再不饱和硫酯中间体的面，用立体有择质子化在2- SI面，给人一种整体顺另外[114]。在聚酮化合物链的情况下，当存在C-2甲基取代基时，烯酰还原具有立体化学后果，产生（2R） - 和（2S）。） - 取决于双键的哪一侧是质子化的配置。对于KR结构域，通过PKS ER的比较序列分析，发现特定残基的存在与还原方向之间的相关性[115]（图17）。当在保守的NADPH结合基序上游约90个残基处的鉴定位置被酪氨酸残基占据时，甲基支链具有S构型。在产生备选R构型的结构域中，该残基通常是缬氨酸，但也是丙氨酸或苯丙氨酸。
![[1860-5397-13-39-17]](/bjoc/content/figures/1860-5397-13-39-17.svg?scale=2.0&max-width=1024&background=FFFFFF)
图17： PKS ER结构域的立体控制。序列基序与C-2甲基的最终立体化学相关[116]。当存在保守的Y时（用三角形表示），观察到（2S） - 甲基立体化学，而在相同位置存在保守的V与（2R） - 甲基立体化学相关。灰色条表示参与结合NADPH辅因子12的残基。残留编号基于大肠杆菌 QOR（PDB ID 1QOR）。经[116]许可转载和改编。版权所有（2010）美国化学学会。
通过DEBS 1-TE衍生物的定点诱变在体内评估这些残基在立体控制中的作用，其中模块2的KR结构域被来自的还原环'（DH-KR-ER tridomains）替代。 DEBS和RAPS PKS（分别给出TKS-ery4和TKS-rap13）[115]。天然TKS-ery4产生三酮内酯20与（2 小号） -甲基，而TKS-rap13产生替代（2 - [R ）-甲基。显着地，当DEBS ER在TKS-ery4的保守y为采用V替代，则得到内酯21只掺入的（2 - [R ）-甲基（图18a）。该结果表明该残基参与ER立体控制。然而，引入TKS-rap13（V至Y）的ER中的等同突变未导致C-2至S的立体化学的预测变化，仅获得亲本产物。在随后的实验[116]中，将（2S）特异性结构域的4个额外残基同时引入同一模型系统内的RAPS ER中，但这仅产生立体化学结果的小的总体变化。![[1860-5397-13-39-18]](/bjoc/content/figures/1860-5397-13-39-18.svg?scale=2.0&max-width=1024&background=FFFFFF)
图18： a）PKS被设计用于测试ER立体特异性残基的作用[115]。通过用来自DEBS模块4的'还原环'（DH-ER-KR）替换DEBS模块2的KR结构域（在DEBS 1-TE的背景下）来创建TKS-ERY4。该PKS产生内酯20结合（2S） - 甲基，与活性位点中保守的Y的存在一致。该Y向备选V的定点突变导致立体化学的完全转变，得到内酯21，具有（2R） - 甲基立体化学。b）来自4'- pro - R的 ER结构域的还原模型NADPH的氢化物。当Tyr存在时，它在还原后充当质子供体，得到（2S） - 甲基。在其不存在时，活性位点相对侧的Lys残基充当一般酸，产生（2R） - 甲基。
另一方面，假定的催化残基（Lys）的诱变而不改变Val对立体化学具有更显着的影响[116]。为了解释这一结果，提出Lys在C-2处用作质子供体，并且在其不存在时，质子从溶剂加到碳阴离子中间体的面的控制较少。基于来自多杀菌素PKS [60]的代表性ER的高分辨率结构，该机制已被扩展以解释保守的Tyr的作用（图18b））。在解析的结构中，Lys和Tyr位于活性位点彼此的相对侧，在适当的位置，以使结合的聚酮化合物基质的C-2碳质子化。当Tyr存在时，它充当质子供体，但在其不存在时（如在其中存在V的天然PKS中），Lys从聚酮化合物底物的相对侧递送其质子（因此解释了逆转用TKS-ery4中的Y至V突变体观察到的立体化学。然而，显然，只需将Tyr引入适当的位置（2 R） - 产生ER（如在TKS-rap13的实验中）不足以超越Lys的质子供体，因此通过定点诱变对ER立体化学的合理操作等待ER活性位点中的进一步立体化学决定子的鉴定。