从N-乙酰基脯氨酸（6）开始进行C-末端酯的合成

从N-乙酰基脯氨酸（6）开始进行C-末端酯的合成，其如前所述制备[50]。参考的甲酯和乙酯1和2通过在室温下在酸性醇（分别为甲醇或乙醇）中搅拌6来制备过夜（方案1A）。我们试图采用相同的方法将6在三氟乙醇中酯化。然而，这导致所需产物5的产率非常低（4％）。单氟和三氟乙酯3和5然后通过相应的氯化氢制备，其如所述（方案1B）[51]产生。该方法的缺点是由N-乙酰化的脯氨酸产生氯化氢导致残余物的部分差向异构化。

最后，通过用3当量的2,2-二氟二氮杂乙烷处理6制备酯4（方案1C）。使用氯仿作为溶剂平稳地进行反应，得到良好的收率（94％）。我们还试图在乙腈/水（1：1）混合物中进行反应。然而，使用直接在溶剂混合物中产生的2,2-二氟二氮杂乙烷仅获得非常低的产率（15％）。因此，我们尝试在乙腈中生成2,2-二氟二氮杂乙烷，随后将该溶液加入到基质的水溶液中。虽然产量增加，但仍然很低（20％）。水性介质中的低产率可以通过重氮甲烷物种的高反应性来解释，这有利于水中的非特异性反应。[52]。最近，还开发了更具体的用于耐水酯化的重氮甲烷试剂[53]。在本文的修订期间，彭等人。报道了使用2,2-二氟二氮杂乙烷酯化羧酸，这是在许多非质子有机溶剂（包括乙腈）中进行的[54]。

水解稳定性

酯键在水性介质中的动力学稳定性是至关重要的，因为它进一步确定了在水性缓冲液的生物学相关条件下与相应酯的反应的时间窗。C末端的酯的水解已经在文献中相当充分描述[55-57] ，表明水解通过假设在缓冲介质中的假一级反应发生[HO - ]是恒定的（等式1-3） ：

特别令人感兴趣的是水解速率对酯的烷基性质的依赖性; 已经证明，与甲酯相比，乙酯的水解速度慢约2-3倍[58]，而氨基酰基-tRNA中甲酯的水解速度比3'-tRNA酯慢约30倍[59]。显然，水解速率取决于烷基部分R的给电子/取出效应，表明部分氟化酯基团可能具有显着受损的动力学稳定性。

接下来，我们按照对酯上述动力学模型确定的半衰期值1 - 5在pH 11和298 K（在水性介质中图2）。根据之前的报道，我们发现乙酯的水解速度比甲酯慢3倍，而第一个氟原子的引入使半衰期降低了约8倍。对于随后的氟原子，水解每个附加的氟原子的速率增加3-4倍。三氟乙酯5提供最快的水解速率，半衰期仅为6.4±1.7分钟。外推至pH 8.0得到107±28小时的值。（这个过程需要乘以1000.）我们通过实验确定pH值为8 的5的半衰期为102±2小时，这与外推法很吻合。用不同动力学模式（pH 11的分钟，pH 8的天数）确定的值的相互一致性提供了它们准确性的良好指示。

这些数据表明，与末端氟化乙酯化学修饰3 - 5能够在数天的过程中在生理学相关pH <8.事实上，这种稳定性使得能够在水中被检查几个化合物的物理化学性质进一步确定; 例如，可以安全地测量分区。值得注意的是，除了由酯酶介导的最常见的路径外，C-末端三氟乙基或二氟乙基酯的水解速率可能表明在生理条件下潜在药物分子的自裂解机制[60]。。尽管如此，含氟酯对天然酯酶的敏感性仍然未知，文献中缺乏对该问题的系统研究。值得注意的是，最近报道了少数其他病例的氟有机分子的pH程序分解[61,62]。

亲脂性

为了表征亲脂性，酯1 - 5分别在298K辛-1-醇和水之间进行到24小时划分所得分区被示出在图3中。根据先前的观察，log P值呈现出复选标记形状：亲脂性随着第一极性C-F键的引入而降低，并且随着随后的氟原子的引入，亲脂性由于分子量的增加而增加。 。2,2-二氟乙基衍生物4的亲脂性几乎与母体乙酯2的亲脂性相同，并且log P与增加的相对差异（5）VS 4，Δlog P = 0.53±0.13）和降低（3 VS 4，Δlog P = -0.45±0.13）中的氟原子的数目为等价于一个甲基的差（2 VS 1，Δlog P = 0.44± 0.08）。变化幅度与最近报道的相应氟化乙醇类似[63]。重要的是，与C-末端酰胺7相比，C-末端酯化保持了更高的亲脂性（表1）。