无花果为桑科榕属Moraceae Ficus植物无花果Ficus carica L. 的果实，又名映日果、文先果、奶浆果等。无花果果实为浆果，具有很高的营养价值和药用价值^[1]。无花果具有药食两用的价值，在我国早有记载。《本草纲目》中称“无花果治五痔、利咽喉、消肿痛、解疮毒”^[2]。《中药大辞典》记载，无花果主治消化不良、大便秘结、痔疮、脱肛、疮疖、咽喉疼痛及阴虚肺热咳嗽等病症^[2-3]。无花果在我国民间具药食同源食品功效，尤其是它的医疗保健价值越来越受到重视。

大量研究表明，无花果作为一种古老的特殊生态天然植物和营养价值较高的果品，其含有多种不同生物活性成分，主要报道有苹果酸、草酸、延胡索酸、琥珀酸、丙二酸、吡咯烷羧酸、莽草酸、奎宁酸、甘油酸等酸类成分，还有植物类黄酮、芸香苷酮糖、醛糖、树酯^[2]以及芳香成分的苯甲醛、呋喃香豆素内酯、补骨脂素、佛手柑内酯等^[4-8]抑癌功效成分。另外无花果含有的有机硒具有强身健体、提高免疫力及防癌抗癌等作用^[9-11]。然而，目前缺乏对无花果应用物质基础分类的深入研究。本实验对无花果果实化学成分进行研究，从其醋酸乙酯提取物中分离得到3个新化合物（图1），分别鉴定为4-羟基-6-甲酰氧基-8α-甲氧基-喹啉-2-酮（4-hydroxyl-6-formyl-8α-methoxyl-quinoline-2-one，1）、5′β,6′α-(双二乙基)-5β,6β-环氧己烷基-环戊酐基-[2,2,1]-2α,3β-环庚烷（5′β,6′α-[(di-ethyl)-5β,6β-cyclohexyl]-epoxyhexyl, cyclo-pentanhydride-[2,2,1]-2α,3β-cycloheptane，2）和 5′β,6′β-[双-(11-甲基丁基, 11′-甲基丁基)-9,9′]环- 8,8′-己二烯基-5α,6α-环氧环己烷基-环戊酐基- [2,2,2,1]-2β,3α-环庚烷（5′β,6′β-[di-(11-methylbutyl, 11′- methylbutyl)-9,9′]-cyclo-8′-hexadiene-5α,6α-epoxyhexyl, cyclo-pentanhydride-[2,2,2,1]-2β,3α-cycloheptane，3）。命名为无花果果素K-1、无花果果素G-1和无花果果素G-2，为无花果药食同源重要功能提供依据。

高效液相-离子阱-飞行时间质谱仪（日本岛津公司）；Avance 400MHz超导核磁共振仪（瑞士Bruker公司）；Nicolet iS5傅里叶变换红外（FT-IR）光谱仪（美国Thermo Fisher公司）；UV-2401紫外光谱仪（日本岛津公司）；元素分析仪（JSX-3400R型ELEMENT ANALYZER能量色散型荧光X射线分析仪，日本电子株式会社）；Waters 600半制备反相高效液相色谱仪（美国Waters公司），LH-20凝胶填料（日本三菱公司）；薄层色谱硅胶GF₂₅₄和柱色谱用硅胶80～100、200～300目（青岛海洋化工厂）；其他试剂均为分析纯。

无花果果实于2017年9月采自郑州市汇川农业科技有限公司无花果基地，由河南农业大学农学院侯高致明教授鉴定为桑科榕属无花果Ficus carica L. 布兰瑞克品种的风干果实，为南京农业科学院培育的已在我国推广的优良品种之一。样品标本（GS-WHG-201709）存放于河南科技大学伏牛山药用植物标本馆内。

取冻干后的无花果果实切片7.0 kg，用70%乙醇超声辅助提取3次，每次5 h，滤过滤渣，合并提取液，室温下静置48 h除去不溶物，提取液减压浓缩后得总浸膏1 256 g。将总浸膏混悬于适量水中，在−4 ℃条件下静置12 h，滤过后清液用醋酸乙酯进行萃取，得到醋酸乙酯提取物136 g，经硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（15∶1、13∶1、10∶1、8∶2、6∶4、1∶1、4∶6、2∶8、0∶10）梯度洗脱，得到8个洗脱部位（A～H）。取B部位20 g，经硅胶柱色谱分离，环己烷-醋酸乙酯（10∶1、8∶2、6∶4、1∶1、4∶6、2∶8、0∶10）梯度洗脱后合并得到6个组分（Fr. i.1～6）。取Fr. i.2 组分6.0 g，经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇（9∶1、7∶1、7∶3、5∶4、1∶1、4∶5、3∶7、1∶7、1∶9）梯度洗脱，TLC追踪，合并相同组分。组分7∶3收集放置后，有沉淀生成，滤去固体沉淀，收集母液，减压下去除溶剂后得到一透明胶状物质，为化合物1（18.3 mg）。取上述Fr. i.4组分8.5 g，经硅胶柱色谱的氯仿-丙酮（10∶1、8∶2、6∶4、1∶1、4∶6、2∶8、1∶10）梯度洗脱，TLC分析收集组分合并，组分8∶2可溶解于氯仿，进一步经Sephadex LH-20脱色纯化后，采用反相高效液相（RP-HPLC）色谱分离纯化，ODS C₁₈反相色谱柱（YMC-PACK-ODS-A， 250 mm×15 mm，5 μm），示差检测器，洗脱剂乙腈-水（90∶10）等度洗脱，体积流量4 mL/min，收集得到2个组分，经鉴定分别得到化合物2（13.4 mg，t_R＝11.00 min）和化合物3（16.2 mg，t_R＝23.00 min）。

化合物1：黄色透明胶状物。HR-ESI-MS显示其分子离子峰m/z 250.066 7 [M＋H]⁺（计算值250.067 1），结合¹H- 和¹³C-NMR（DEPT）谱确定其分子式为C₁₂H₁₁NO₅。相对分子质量结合元素分析（C：57.60%，H：4.45%，N：5.62%）证实化合物含有奇数个氮原子。样品溶于氯仿，与碘化铋钾（dragendorff）试剂显色反应显橙红色，初步判断与元素分析结果一致，为含氮生物碱化合物。其红外光谱在3 440, 1 670, 1 543, 1 472 cm⁻¹显示了强的吸收，提示化合物中存在羟基、羰基（内酰胺）和芳环的共振吸收；紫外光谱在278、230和214 nm有最大吸收也证实化合物中存在羰基和芳环结构。在¹H-NMR (400 MHz,CDCl₃) 谱中，δ_H 7.27 (1H, s), 7.22 (1H,d, J = 3.5 Hz), 6.51 (1H, d, J = 3.5 Hz) 提示化合物含有1组芳氢信号；后者在相互偶合的1个自旋系统中，基于其偶合常数，确定该化合物为芳杂环化合物的结构。另外δ_H 9.59 (1H, s, 4-OH) 提示有1个醛基氢或者1个烯醇氢的存在；还有1个甲氧基信号在δ_H4.72 (3H, s, -OCH₃) 和1个酰甲基氢信号在1.25(3H, s, -OCOCH₃)。基于¹H-NMR分析，初步判断化合物1具有喹啉-2-酮生物碱preskimmianine^[12]相同骨架的母核结构。从化合物1的¹³C-NMR（DEPT）谱（表1）中可以明显观测到1组4,6,8-三取代2-喹啉酮的信号δ_C 166.8 (C, C-2),52.4 (C, C-4), 160.6 (C, C-6), 130.9 (C, C-8)；1个乙酰氧基碳信号δ_C 19.2, 177.7 (CH₃CO-, C-1′, C-2′)，1个甲氧基信号在δ_C 57.6 (C-3′)。化合物1中各取代基的位置进一步通过HMBC确定。在HMBC谱中，观测到了H-3, H-5与C-4相关交叉信号，H-3与C-10的相关信号（图2），从而证实了酚羟基取代在母核的C-4位上；H-3与C-2的相关信号证明喹啉环酮羰基的存在。进一步根据甲氧基氢H-3′与C-8的HMBC相关以及H-7与乙酰氧基羰基C-1′和C-6、C-7交叉相关，H-5与乙酰氧基羰基C-1′的HMBC

相关，确定了甲氧基和1个乙酰氧基分别取代在喹啉-2-酮母核的苯环上的C-8和C-6位上。因此，化合物的结构被确定为4-羟基-6-甲酰氧基-8-甲氧基-喹啉-2-酮。该化合物的结构可进一步通过¹H-¹HCOSY、HSQC、HMBC图谱得到确证。该化合物取代基的构型基于NOESY图谱观察，只有3′-甲氧基上的H与喹啉环上亚氨基H键上的H原子有相关信号（图2），由此可推断8位上的甲氧基为α-取代。这可能是喹啉环的刚性结构决定的。因此化合物1被确定为1个新的喹啉-2-酮类化合物，推测其化学结构为4-羟基-6-甲酰氧基-8α-甲氧基-喹啉-2-酮。其核磁数据归属见表1。

化合物2：淡黄色透明胶状物。HR-ESI-MS m/z:281.138 7 [M＋H]⁺（计算值281.138 4），确定其分子式为C₁₅H₂₀O₅。(cm⁻¹): 2 926, 1 732, 1687, 1 458, 1 216, 1 046，提示分子中含有非共轭的羰基和环氧结构的共振吸收。化合物与碘化铋钾（dragendorff）试剂显色反应阴性，初步判断该化合物不含氮。¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) 谱从高场至低场显示有3组信号峰，1组甲基信号峰在δ_H 0.93 (3H, m) 和1.06 (3H, m)；从δ_H1.25～2.65的信号峰，提示共含有10个饱和H原子；另外还可观察到含氧区有2组信号分别在δ_H 3.53 (2H, dd, J = 4.6, 2.0 Hz) 及δ_H 4.10(1H, dd, J = 3.7, 2.0Hz) 和4.09 (1H, dd, J = 3.7, 2.0 Hz)。从化合物2的¹³C-NMR谱中可以观测到共有15个碳峰信号，且明显成对存在，表示该化合物的高度对称性。结合2的¹H-¹H COSY图谱显示，以上核磁谱分别代表2个磁不等价自旋系统的相关质子信号，1个是-CH₂-CH-OCH-CH- CH-CH-为含有7个氢的自旋体系，另一个是 (-OCH-CH₂-CH₃)₂为含有12个氢原子的自旋体系，并呈强烈对称性，是化合物2的结构特征（表2）。基于¹³C-NMR（DEPT）图谱显示，分子中有1对羰基信号分别位于δ_C169.9和164.9，另有1对含氧碳的信号峰在δ_C  60.5 (CH) 和δ_C 58.8 (CH)，提示化合物可归属为含环氧醚的酸酐类化合物，与1,2-二环[2,2,2] 庚烷二甲酸酐型化合物类似^[13-14]。基于上述2组自旋系统的存在，将分别对应于¹³C-NMR（DEPT）的1组氧代环庚烷信号（C1～C7）和另1组二氧代双取代烷信号（C-1′, C-1″, C-2′, C-2″和C-3′, C-3″）。因此化合物2的骨架结构和各取代基的位置进一步通过2D谱HMQC和HMBC确定。在HMBC谱中，可观察到H-4与C-3′、C-6，H-1与C-2′、C-6相关（图3），确定了环戊酐连接在C-3和C-2位置上；另外被观察到的信号在H-5′与C-9、H-6′和C-9′分别交叉相关，H-5与C-7、C-6相关，从而证实了二乙基环氧醚环连接在母核环庚烷的C-5和C-6位上（图3）。由此确定化合物2为1个新的环氧醚的酸酐类化合物，化学名称为5′,6′- (双二乙基)-5,6-环氧己烷基-环戊酐基-[2,2,1]-2,3-环庚烷（2）。其核磁数据归属见表2。

化合物2的立体结构的相对构型，可进一步通过它的NOESY谱图信息中取代基的氢原子和骨架上氢原子的H-H相关进行推断（图4）。从NOESY图谱的H-6′与H-6和H-5′与H-5交叉相关，证明环氧取代为a,a键取代的顺式构型；从H-6与H-1和H-5与H-3的交叉相关，揭示酸酐环为e,a键取代的反式构型。从取代基上H-8与H-5′相关和取代基的H-8′与H-6′无相关信号，证明了2个饱和链烃的取代为a,e键的反式取代。这是因为环氧六环的刚性因素决定。化合物2的3D构型见图4。因此化合物2的立体结构为5′β,6′α-(双二乙基)-5β,6β-环氧己烷基-环戊酐基-[2,2,1]-2α,3β-环庚烷。

化合物3：黄色透明固状物。HR-ESI-MS m/z:387. 212 2 [M＋H]⁺（计算值387.212 7），确定其分子式为C₂₃H₃₀O₅。与碘化铋钾（dragendorff）试剂显色反应阴性，判断该化合物不含氮。对比化合物3与2的核磁数据，提示化合物3与2是具有相同的母核结构的衍生物，不同之处在于化合物3的¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) 谱图中，分别在芳烃区和高场信号区均多出1组信号峰，结合3的¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) 和DEPT、HSQC谱中给出典型的信号峰，可归属不同的2组信号为双键δ_C 129.6, 128.4, 127.6, 126.8（表2），提示分子中的2个不饱和双键的存在；烷烃取代基信号为典型的末端异丙基信号在δ_C 23.9, 22.3,28.1, 28.4, 20.3, 19.1, 15.9, 15.7等，8个碳呈对称的分布在不同侧链上（表2）。因此，初步推测化合物3为不同于2的含有烯烃的同系物。进而根据侧链的双键不饱和烃基片段，通过¹H-¹H COSY、HSQC及HMBC谱，对侧链片段的碳氢信号进行了归属。在HMBC谱中（图5），双键上2个氢信号H-8 (δ_H 7.43, 1H, s) 与C-6′、C-11存在远程相关，H-8′ (δ_H 6.98, 1H, s)与C-10′和C-11′存在远程相关，以及H-5′ (δ_H 4.13, 1H, m) 与C-9′信号相关，H-13 (δ_H 0.90, 3H, d, J = 7.3 Hz) 与C-10′的相关交叉被观察到，从而确定2个对称的饱和烃基侧链，连接在环己二烯的C-9和C-9′位，形成了二取代的环己二烯取代基^[14]并合到环氧醚环的C-5′和C-6′位上。环庚烷母核上的H-7a (δ_H1.99, 1H, dd, J = 3.1, 6.9 Hz) 与C-3, H-4与C-3′的相关信号，和H-7e (δ_H 2.06, 1H, dd, J = 3.1, 6.9 Hz) 与C-6的交叉相关信号，确认化合物3具有的环庚烷酸酐骨架衍生物特征^[13]，化合物3因此具有4个并合环。化合物3被进一步确定为1个新的环氧醚的酸酐类化合物。其化学名称被命名为5′,6′-[双-(11-甲基丁基,11′-甲基丁基)-9,9′]-环-8,8′-己二烯基-5,6-环氧己烷基-环戊酐基-[2,2,2,1]-2,3-环庚烷（3）。其核磁数据归属见表2。

化合物3的立体结构的构型通过NOESY谱图（图6）信息进行推测。其H-6′与H-5′和H-6与H-5交叉相关，证明环氧取代为e,e键取代的顺式构型；从H-6与H-2没有相关，而H-5与H-3的交叉相关信号被观察到，揭示酸酐环同样为e,a键取代的反式构型。其他环上取代只有同向取代一种构型存在。化合物3的构型如图6中3D立体图所示，因此化合物3的立体结构确定为5′β,6′β-[双-(11-甲基丁基,11′-甲基丁基)-9,9′]-环-8,8′-己二烯基-5α,6α-环氧己烷基-环戊酐基- [2,2,2,1]-2β,3α-环庚烷。

无花果为我国较古老的栽培树种，它的新鲜果实广为人们喜爱，其中布兰瑞克品种的果实是优良的早熟鲜食品种之一。本实验分离得到的3个化合物中，香豆素类成分多有文献报道，有可能是该植物的标志性成分，酸酐类和喹啉类化合物在该植物中尚属首次报道^[14-15]。众所周知，不同品种（包括野生和种质驯化和培育）、不同时期的果实（包括未成熟果实、成熟果和干果），其化学成分肯定有差异和显著区别。现有的种质资源通过杂交和后代的表型选择，会发生性状的转移与改良，这也必然会造成成分的改变。因此高效的农业生态产业的迅猛发展，对药食同源植物品种的优育，也是人们期盼和积极关注的。

参考文献（略） 

来  源：尹卫平，冯书晓，王水永，张洪涛，朱培文，胡永鑫，何纪虎，苏会浩，朱丽妍，白  洁. 无花果果实中新喹啉和新酸酐化合物 [J]. 中草药, 2019, 50(2):318-323.