细胞表面蛋白（Surfaceome）是免疫治疗靶点发现的核心领域——CAR-T、双抗、ADC 都要从这里寻找锚点。但传统表面组学技术长期面临两个瓶颈：灵敏度不足（通常需要 500 万以上细胞）和覆盖面有限（单一官能团标记只能捕获部分表面蛋白）。2026 年 4 月发表于 Molecular & Cellular Proteomics 的 SUCAM（Surfaceome Capture by Multiplex biotinylation）技术，用"多重生物素化"思路同时解决了这两个问题。

一、SUCAM 核心思路：多重官能团同时标记

传统表面蛋白标记化学本质上依赖"对单一残基类型下手"：

• Sulfo-NHS-SS-Biotin → 主要修饰赖氨酸 ε-氨基；

• 马来酰亚胺-PEG-生物素 → 主要修饰游离半胱氨酸的巯基；

• 苯甲醛生物素 → 修饰 N 端 α-氨基或赖氨酸（经亚胺还原后）。

这类"单官能团"策略的问题是：任何一类修饰都不可能覆盖所有表面蛋白。半胱氨酸密度低的蛋白（如许多单次跨膜受体）会被 NHS-酯漏掉；赖氨酸残基位于跨膜区附近的蛋白则会被巯基化学漏掉。

SUCAM 的核心创新是同时使用多种生物素化试剂，分别针对不同官能团进行衍生化标记，相当于给"漏检"的蛋白补了一道兜底网。

二、SUCAM 技术流程

整个 SUCAM 实验流程可以拆为四步：

1. 多重生物素化：在活细胞上同时施加 NHS-酯生物素、马来酰亚胺生物素等试剂组合，分别对赖氨酸、半胱氨酸等不同残基进行标记；

2. 温和裂解：采用不破坏生物素-链霉亲和素相互作用的裂解缓冲液；

3. 链霉亲和素磁珠捕获：一次拉下所有被生物素化的表面蛋白；

4. LC-MS/MS 鉴定：对拉下的蛋白进行酶解、质谱、数据库检索。

三、关键性能数据

仅 120 万细胞即可完成一次完整的表面组学定量——这意味着原本只能丢弃的稀有临床样本（穿刺活检、循环肿瘤细胞、儿童白血病骨髓样本）现在也可以做表面组学了。

五、应用成果：白血病细胞表面组图谱

研究团队将 SUCAM 应用于一组白血病细胞系，取得了若干重要发现：

• 已知抗原验证：成功识别了 CD19、CD20、CD22 等白血病经典细胞表面抗原，验证了方法的可靠性；

• 新靶点发现：鉴定了此前在该疾病中未被表征的多个表面蛋白，为免疫治疗提供了新的候选靶点；

• 低输入稳健性：在仅 120 万细胞的低输入条件下，定量精度仍保持在 CV < 5%。

这一成果意味着 SUCAM 将促进血液肿瘤和实体瘤的表面组学分析及治疗靶点发现，为抗体药物、CAR-T 疗法、ADC payload 筛选提供更完整的"靶点地图"。

六、对定制合成的需求映射

SUCAM 技术的扩散将带动以下化学工具的需求：

• 多重官能团生物素化试剂盒：组合包装的 NHS-酯/马来酰亚胺/苯甲醛生物素；

• 可裂解生物素探针：在捕获后能从链霉亲和素上温和释放目标蛋白，便于下游功能性实验；

• 细胞渗透性生物素化试剂：用于胞内表面蛋白循环再利用研究；

• 生物素-PEG-荧光基团组合探针：同时实现富集 + 荧光定量。

纳孚生物具备多重生物素试剂的定制合成能力，可根据客户的实验设计灵活调整官能团组合、连接臂长度（PEG2–PEG12）、报告基团（荧光、放射性核素）等参数，为单次项目和长期试剂盒开发两种模式都提供支持。

如果您正为某类罕见临床样本的"细胞数不够"发愁，SUCAM 的"多重标记"思路或许能帮您打开新的设计空间。

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