分享一篇发表在PNAS的文章：PurA is the main target of aurodox, a type III secretion system inhibitor.文章的通讯作者是北里大学的Yukihiro Asami教授和Satoshi Ōmura教授，前者主要研究方向是微生物天然产物和开发抗生素，后者是2015年诺贝尔生理学或医学奖得主之一，其主要研究方向是筛选和分离天然产物。
微生物耐药性是全球健康面临的巨大威胁之一，因此需要开发尽可能不会引起病原体耐药性的抗生素。作者之前的工作中把目光主要集中在了革兰氏阴性菌的III型分泌系统，该系统主要负责把转位子和效应蛋白运输到宿主细胞中，其对于疾病过程是不可或缺的，但是其本身不是细菌存活所必需的，因此针对这一系统开发的抗生素也许会降低耐药细菌的产生。作者之前筛选到一种天然产物aurodox（AD），其可以有效地抑制小鼠的细菌感染，但是尚不清楚其分子靶标，这里作者集中在探究AD的蛋白靶标。首先作者通过对AD的抑菌能力和抗溶血能力进行测试，发现其抗溶血能力显著优于抑菌能力，表明其抑制小鼠感染并不完全是通过杀死细菌导致的，因此作者想知道其蛋白靶标是什么。作者将AD与带有光交联基团的琼脂糖珠连接，构建了可以富集AD相互作用蛋白的beads，随后通过切胶回收明显的蛋白条带，进行MALDI-TOF/MS分析，证明了其中的一个蛋白是腺苷酸基琥珀酸合成酶（PurA）。之后作者通过敲除PurA证明了其是III型分泌系统介导的溶血活性所必需的，并且其敲除与AD处理都可以观察到III型分泌蛋白EspA/B/D的减少，表明PurA缺失会抑制III型分泌蛋白的产生。随后作者通过合成生物素化的PurA，结合生物层干涉测量（BLI）证明了AD与PurA是直接结合的，并且具有较强的亲和力。最后作者将野生型和PurA缺失的啮齿念珠菌接种到小鼠中，证明了PurA的缺失会导致啮齿念珠菌对小鼠毒力的下降。总之，作者通过质谱以及遗传手段证明了天然产物AD的蛋白靶标是PurA，并首次发现PurA在III型分泌系统中起着重要作用，这为后续抗生素的开发提供了新的见解。文章链接：https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2322363121原文引用：DOI: 10.1073/pnas.2322363121
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